ОПРЕДЕЛЕНИЕ, ОЧИСТКА И СТРУКТУРНЫЙ АНАЛИЗ ГЛИКОПРОТЕИНОВ

Определение

Гликопротеины могут быть выделены из сложных смесей (например, из клеточных мембран) при помощи ПААГ с ДСН (см. гл. 2) и выявлены путем окрашивания реактивом Шиффа с йодной кислотой, который идентифицирует альдегидные группы сахаров, образующихся при действии йодной кислоты. Они могут быть также определены визуально путем радиоавтографии в ПААГ-ДСН по включению метки при инкубировании клеток или тканей с соответствующими радиоактивными сахарами.

Очистка и структурный анализ

Определение структуры гликопротеинов требует (как и в случае других молекул) их предварительной очистки, которая может быть достигнута с помощью методов, обычно применяемых для белка. Для очистки некоторых гликопротеинов оказалось весьма плодотворным также применение аффинных колонок с лектинами (см. ниже). Углеводный состав гликопротеинов определяли после кислотного гидролиза при помощи газожидкостной хроматографии—масс-спектрометрии (ГЖХ—МС). Для изучения детальной структуры олигосахаридных цепей было опробовано множество различных методов. Наиболее эффективной оказалась комбинация ГЖХ—МС и ЯМР-спектрометрии с высоким разрешением. Особенности связей между сахарами в гликопротеинах (рассмотрение которых не входит в задачу данной главы) имеют фундаментальное значение для структуры и функций этих молекул.