КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РНК (по Мейбаум)

В основу метода положена известная реакция пентоз с орцином (см. раздел «Химия и обмен углеводов»).

Реактивы: а) хлорное железо -ный раствор в концентрированной соляной кислоте; б) орцин (-метилрезорцин): раствор (10 мг/мл) готовят перед употреблением на солянокислом растворе хлорного железа (см. выше); в) раствор РНК, (приготовление — см. «Очистка и разделение нуклеиновых кислот»).

К 2 мл раствора РНК прибавляют столько же раствора орцина, нагревают 20 мин. на кипящей водяной бане и охлаждают под краном. Жидкость окрашивается в зеленый или синевато-зеленый цвет.

Измеряют поглощение раствора в фотоэлектроколориметре с красным фильтром (670 нм). Содержание РНК вычисляют по калибровочной кривой, составленной по стандартным растворам РНК или рибозы. Предложена модификация метода Мейбаум, повышающая точность определения: после охлаждения окрашенный продукт экстрагируют изоамиловым спиртом, центрифугируют. Измеряют поглощение спиртовой фракции при 670 нм. против контроля (раствор орцина), обработанного таким же образом, как и испытуемая проба.

Содержание РНК рассчитывают по калибровочной кривой.