БЫСТРЫЙ МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ
Метод основан на способности белков количественно адсорбировать краситель оранж Ж. Он предложен для определения содержания белков в молоке (У. С. Ашворт, Р. Силс, Р. Э. Эрб, Д. С. Жебровский, Р. Тейнберг), картофельном соке (А. С. Вечер и О. К. Василькевич). Этот быстрый и удобный метод позволяет достигнуть удовлетворительной точности.
Реактивы и материалы: а) молоко; б) лимоннокислый раствор красителя оранж Ж: 1 г красителя оранж и 21 г лимонной кислоты растворяют в 400— 500 мл дистиллированной воды в мерной колбе емкостью 1 л. К раствору добавляют 2,5 мл 10%-ного раствора
тимола в 95%-ном этиловом спирте и доливают водой до метки. Раствор хранят в темном месте.
Посуда и приборы: а) мерные цилиндры или конические колбы на 50 мл с притертыми пробками; б) градуированные пипетки на 2 мл; в) бюретка на 50 мл со стеклянным краном; г) воронки стеклянные; д) пробирки мм; е) фотоэлектроколориметр ФЭК-М, или ФЭК-Н-57.
В два мерных цилиндра или конические колбы с притертыми пробками одной и той же пипеткой вносят по 1 мл молока. Из пипетки в каждый сосуд прибавляют, перемешивая, по 25 мл лимоннокислого раствора краски оранж закрывают пробками и взбалтывают 30—40 с, затем ставят в затененное место на полчаса, после чего снова тщательно взбалтывают и фильтруют в пробирки.
Оптическую плотность фильтрата каждой пробы исследуют на фотоэлектроколориметре ФЭК-М, или ФЭК-Н-57. В качестве стандартного раствора употребляют лимоннокислый раствор красителя оранж разведенный дистиллированной водой в сочетании
Пользуются правой шкалой прибора. Светофильтр синий с областью максимального пропускания 453 нм. Рабочая длина кювет 1,070 или 1,065 мм. Процентное содержание белка в молоке у рассчитывают по формуле
где х — показательшкалы оптической плотности прибора.
Заранее составляют калибровочную кривую, градуируя шкалу оптической плотности фотозлектроколориметра в процентах белка, для чего проводят не менее 50—60 параллельных анализов проб молока по колориметрическому методу (или методу Къельдаля) и по адсорбции красителя. Калибровочную кривую составляет обычно лаборант для каждого прибора (в начале учебного года).