ВИТАМИН РР (В5, НИКОТИНОВАЯ КИСЛОТА, НИКОТИНАМИД)

Общие сведения.

Витамин РР по своей химической природе является никотиновой кислотой и ее амидом — никотинамидом:

Биологическая активность никотиновой кислоты и ее амида в общем одинакова, но в организме встречается преимущественно никотинамид, так как никотиновая кислота легко подвергается амидированию. Это дало основание некоторым исследователям считать никотиновую кислоту провитамином РР, а ее амид — витамином. Амид никотиновой кислоты — важнейший участник процессов биологического окисления. Он входит в состав анаэробных дегидрогеназ, коферментами которых являются никотинамидадениндинуклеотид (НАД) и никотинамидаде-ниндинуклеотидфосфат (НАДФ).

Авитаминоз РР (пеллагра) есть результат нарушения окислительно-восстановительных процессов в организме вследствие недостатка никотинамида, необходимого для синтеза кодегидрогеназ.

Витамин РР довольно широко распространен в продуктах животного и растительного происхождения.

Суточная потребность человека составляет (в зависимости от возраста, тяжести труда и состояния организма) 15—25 мг.

Качественные реакции на никотиновую кислоту.

Реакция с уксуснокислой медью. Никотиновая кислота, реагируя с солями меди в уксуснокислой среде, образует медную соль никотиновой кислоты (никотинат меди) синего цвета

Реактивы: а) никотиновая кислота, 0,75%-ный раствор (в горячей воде); б) уксусная кислота, 15%-ный раствор; в) уксуснокислая медь, 5%-ный раствор.

К 2 мл раствора никотиновой кислоты добавляют 1 мл 15%-ного раствора уксусной кислоты и нагревают до начала кипения, после чего приливают 1-1,5 мл раствора уксуснокислой меди. В пробирке сначала появляется голубоватая муть, а затем выпадает синий осадок медной соли никотиновой кислоты.

Реакция с углекислым натрием. При нагревании никотиновой кислоты с безводным углекислым натрием появляется специфический неприятный запах пиридина.

Реактивы: а) никотиновая кислота, в порошке; б) углекислый натрий, безводный.

В небольшом фарфоровом тигле смешивают 0,05 г никотиновой кислоты с 0,1-0,15 г безводного углекислого натрия и подогревают. Появляется резкий запах пиридина.

Отличие никотинамида от никотиновой кислоты. При нагревании никотинамида с едким натром выделяется аммияк.

Реактивы: а) никотинамид, в порошке; б) никотиновая кислота, в порошке; в) едкий натр, 40%-ный раствор.

Немного порошка никотинамида (на кончике шпателя) всыпают в пробирку, добавляют 2 мл воды, половину объема 40%-ного раствора едкого натра и подогревают 5 мин. на кипящей водяной бане. Появляется запах аммиака. К отверстию пробирки подносят красную лакмусовую бумажку, смоченную водой. Она синеет.

Проделывают ту же реакцию с никотиновой кислотой — выделения аммика не наблюдается.

Определение содержания никотиновой кислоты в пищевых продуктах (по В. М. Иосиковой)

Никотиновая кислота, реагируя с бромроданом и анилином (или другими ароматическими аминами, например метолом), образует соединение, окрашенное в желтый цвет (производное глютаконового альдегида).

Реактивы: а) стандартный раствор никотиновой кислоты. Вначале готовят основной раствор. 25 мг кристаллической никотиновой кислоты растворяют в мерной колбе емкостью 50 мл в 96%-ном этиловом спирте. 1 мл основного раствора пипеткой переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки 96%-ным этиловым спиртом, получая стандартный раствор, в 1 мл которого содержится 10 мкг никотиновой кислоты; б) раствор роданбромида (готовится лаборантом!). В 10 мл 0,1 н раствора роданистого калия (KCNS) или роданистого аммония растворяют 1 г бромистого калия к раствору прибавляют 1 мл раствора соляной кислоты (1:1) и (под тягой!) по каплям (из автоматической пипетки) 2 мл брома. Не давая раствору остыть, тотчас же используют его для реакции; в) раствор анилина. Анилин перегоняют над цинковой пылью. Один объем свежеперегнанного анилина растворяют в шести объемах 96%-ного этилового спирта. Раствор должен быть бесцветным. Хранят в холодильнике в склянке из темного стекла; г) этиловый спирт, 95-96%-ный; д) асканит (бентонит), активированный. Асканит заливают 7%-ным раствором соляной кислоты, настаивают 20 мин., нагревают до кипения, затем охлаждают, отфильтровывают, многократно промывают дистиллированной водой до отрицательный

реакции промывных вод на хлор-ион (проба с азотнокислым серебром), высушивают в сушильном шкафу при 120° С, после чего растирают в сухой ступке и всыпают в банку с притертой пробкой; е) едкий натр, 20%-ный раствор; ж) едкий натр, 1 н раствор; з) универсальный индикатор; и) сернокислый цинк, насыщенный раствор; к) марганцовокислый калий, 1 н раствор; л) трифосфат калия (калий фосфорнокислый трехзамещеный, ), кристаллический; м) соляная кислота (1:1); н) соляная кислота, 1 н раствор.

Навеску растертого исследуемого продукта (1—20 г) берут в зависимости от примерного содержания витамина РР. В ней должно содержаться 100-150 мкг никотиновой кислоты. Навеску заливают 100 мл нормальной соляной кислоты и подвергают гидролизу в течение часа на кипящей водяной бане. Солянокислую вытяжку охлаждают, затем нейтрализуют 20%-ным раствором едкого натра до pH 6,5 (под контролем универсального индикатора), после чего к ней добавляют 100 мл 95-96%-ного этилового спирта и хорошо перемешивают. Выпавший осадок отфильтровывают на воронке Бюхнера, а к прозрачному фильтрату прибавляют 2 г асканита и взбалтывают с адсорбентом в течение 3 мин. Асканит отфильтровывают на маленькой воронке Бюхнера. Фильтр с асканитом переносят в ту же колбу, в которой обрабатывали вытяжку адсорбентом, добавляют 25 мл нормального раствора едкого натра и встряхивают колбу в течение 3 мин. для элюирования никотиновой кислоты. Взвесь переносят в центрифужную пробирку или стаканчик и центрифугируют. Объем центрифугата измеряют тем же цилиндром, которым отмеривали раствор едкого натра, йотом его без потерь переливают в стакан и прибавляют раствор сернокислого цинка до pH 6,5 (по универсальному индикатору). Образовавшуюся в стакане густую массу фильтруют (на воронке Бюхнера). Фильтрат нагревают на электрической плитке и к нему по каплям добавляют нормальный раствор марганцовокислого калия до получения прозрачного раствора (окисление посторонних примесей). Расходуют обычно 4—6 капель раствора.

После охлаждения содержимое колбы центрифугируют. Центрифугат обрабатывают кристаллическим (индикатор — спиртовой раствор фенолфталеина), после

чего добавляют раствор соляной кислоты (1:1) до pH 6,5 и фильтруют на воронке Бюхнера.

5 мл испытуемой вытяжки и 5 мл стандартного раствора никотиновой кислоты прогревают 5 мин. на кипящей водяной бане (в отдельных стаканчиках), затем к ним одновременно прибавляют по 2 мл роданбромидного раствора и 7 мл спиртового раствора анилина. Смеси оставляют на 30—40 мин., потом фильтруют через бумажные фильтры и колориметрируют в колориметре или фотоэлектрофотоколориметре (со светофильтром 440 нм). В фотоколориметре в качестве контроля применяют водный раствор этилового спирта (1:1).

Содержание никотиновой кислоты (в миллиграммах на 100 г веса продукта) рассчитывают:

а) при пользовании колориметром типа Дюбоска по формуле

где 25 — количество нормального раствора взятое для элюирования никотиновой кислоты, а — навеска продукта, г; v — объем элюата после извлечения никотиновой кислоты нормальным раствором и центрифугирования, — объем элюата после обработки раствором сернокислого цинка, — показания шкалы колориметра для стандартного раствора, мм; то же для испытуемого раствора, мм; 5 — объем вытяжки, взятой для реакции, — содержание никотиновой кислоты в стандартного раствора, — коэффициент пересчета, — пересчет в миллиграммы;

б) при пользовании фотоэлектроколориметром по формуле

где — оптическая плотность соответственно испытуемого и стандартного растворов.