ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО СОДЕРЖАНИЯ ФОСФОРА В МОЛОКЕ

Соединения фосфора играют большую и разностороннюю роль в обмене веществ. Фосфор — один из важнейших структурных элементов; более 85% его общего количества в организме сосредоточено в скелете. Фосфорная кислота и ее соединения — непременные компоненты синтеза нуклеиновых кислот, нуклеопротеидов, фосфопротеидов, фосфатидов, ряда коферментов (НАД, НАДФ, ФМН, ФАД, пиридоксальфосфата, ТПФ и др). Соединения фосфора — активные участники гликолиза, гликогенолиза, окислительного фосфорилирования и ряда других обменных процессов. Соли фосфорной кислоты входят в состав буферной системы, поддерживающей относительное постоянство pH крови.

Фосфор распространен в пищевых продуктах, много его в молоке, твороге, сыре, яйцах, мясе, горохе, фасоли, ржаной муке и хлебе. В женском молоке фосфора содержится в среднем коровьем — 80, козьем —

Содержание фосфора в молоке и других продуктах чаще всего определяют с помощью колориметрического метода Фиске — Суббароу (по образованию так называемой «молибденовой сини»). Сущность этого метода состоит в том, что неорганические фосфаты образуют комплексные соединения с молибденовокислым аммонием, которые затем восстанавливаются в продукты, окрашенные в синий цвет («молибденовая синь»). Интенсивность окраски пропорциональна содержанию фосфора в растворе. Органические соединения фосфора (например, фосфопротеиды, нуклеопротеиды, нуклеотиды, фосфатиды и др.) должны быть предварительно минерализованы.

Реактивы и материалы: а) молоко; б) серная кислота, концентрированная; в) молибденовокислый аммоний, 2,5%-ный раствор. В 300 мл воды растворяют 12,5 г молибденовокислого аммония. В отдельном сосуде

к 125 мл воды осторожно приливают 75 мл концентрированной серной кислоты. После остывания оба раствора сливают вместе; г) эйконоген, -ный раствор. В мерной колбе на 250 мл растворяют 59,5 г и 2 г безводного раствор фильтруют. К 125 мл раствора добавляют 0,5 г эйконогена (1-амино-2-нафтол-4-сульфоновой кислоты) и доливают водой до 200 мл. Раствор не должен иметь щелочную реакцию. Хранят в плотно закрытой склянке темного стекла. Срок годности — до двух недель. Вместо эйконогена можно пользоваться свежеприготовленным 0,2%-ным водным раствором аскорбиновой кислоты; д) пергидроль; е) стандартный раствор: 4,394 г однозамещенного фосфорнокислого калия (промытого спиртом для удаления следов двузамещенного фосфата, перекристаллизованного и высушенного в эксикаторе над серной кислотой) растворяют в воде в мерной колбе на 1 л. Получают основной раствор, 1 мл которого содержит 1 мг фосфора. Из основного раствора готовят рабочий, разбавляя его водой в 20 раз. 1 мл рабочего раствора содержит 0,05 мг фосфора. Для повышения устойчивости к основному и рабочему растворам добавляют по 15—20 капель хлороформа.

В большую пробирку из тугоплавкого стекла наливают 0,5 мл молока и 2 мл концентрированной серной кислоты. Одновременно проводят контрольный опыт с 0,5 мл воды и 2 мл серной кислоты.

Обе пробирки закрывают маленькими воронками и ставят в наклонном положении на песчаную баню (под тягой!). Осторожно нагревают до обугливания, после чего охлаждают, прибавляют в каждую пробирку по 0,5 мл пергидроля и нагревают до кипения, кипятят несколько минут. Указанную операцию повторяют до полного обесцвечивания жидкости.

Бесцветные минерализаты (опытной и контрольной проб) количественно переносят в две мерные колбы на 100 мл и доводят водой до меток. Пипетками берут по 5 мл опытного и контрольного растворов и вносят в мерные колбы на 50 мл. В колбу с контрольным раствором добавляют 1 мл стандартного раствора В обе колбы приливают по 1 мл раствора молибденовокислого аммония, 0,5 мл раствора эйконогена (или 1 мл свежеприготовленного 0,2%-ного раствора аскорбиновой кислоты) и по 5 мл воды. Колбы ставят на 15—20 мин., потом

доводят водой до метки, перемешивают и колориметрируют.

Содержание фосфора (в миллиграммах на 100 мл молока) рассчитывают по формуле

где 0,05 — содержание фосфора в 1 мл стандартного раствора, мг; Н —показания колориметра для контрольного раствора; — показания колориметра для опытного раствора; — количество молока, содержащееся в 5 мл раствора минерализата, взятых для определения фосфора (т. е. в тех 5 мл раствора, которые были внесены в мерную колбу на