ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖЕЛЕЗА В ПЛАЗМЕ ИЛИ СЫВОРОТКЕ КРОВИ (по прописи П. А. Розенберг и Н. К. Бялко)

Железо входит в состав соединений, принимающих участие в транспортировке кислорода (гемоглобин, миоглобин) и процессах тканевого дыхания (пероксидаза, каталаза, цитохромы).

Содержание железа в сыворотке крови человека составляет в среднем

В тканях закисное железо преимущественно находится в виде ферритина — комплексного соединения с белком и фосфорной кислотой. Ферритин содержит до железа. Наиболее им богаты селезенка, печень, слизистая оболочка кишечника.

Ионы закисного железа в плазме крови образуют с -глобулинами подвижную транспортную форму — транс-ферритин, который поступает в костный мозг. В костном мозге трансферритин главным образом используется на образование гемоглобина, часть же его превращается в ферритин.

Железо в ферритине способно к окислительно-восстановительным реакциям. Восстановленный ферритин диссоциирует на белковую часть — апоферритин и ионы двухвалентного железа. Окисленный ферритин (-довольно устойчивое соединение, в основном играет роль запасного вещества.

Суть метода состоит в том, что окисные соли железа реагируя с роданидами в кислой среде, образуют соединение, окрашенное в красный цвет

Интенсивность окраски пропорциональна содержанию ионов окисного железа в растворе.

Реактивы и материалы: а) сыворотка крови или негемолизированная плазма; б) серная кислота, концентрированная; в) пергидроль; г) роданистый калий, 1,5 н раствор. 146 г роданистого калия растворяют в 300 мл воды в мерной колбе на 1 л. К раствору добавляют 20 мл ацетона, перемешивают и доводят водой до метки; д) калий надсернокислый (калий-персульфат) — насыщенный раствор; е) стандартный раствор. Вначале готовят основной раствор: 0,0703 г аммонийсернокислого железа (соли Мора) растворяют в воде в мерной колбе на основного раствора содержит 0,1 мг железа. Основной раствор разводят водой в 10 раз, получая рабочий, в 1 мл которого содержится 0,01 мг железа.

Органические соединения железа подвергают минерализации, для чего в пробирку из тугоплавкого стекла вносят 2 мл сыворотки или негемолизированной плазмы, добавляют 1,5 мл концентрированной серной кислоты и нагревают на песчаной бане, время от времени добавляя по 0,5 мл пергидроля (см. «Определение общего содержания фосфора в молоке»).

Охлажденную бесцветную жидкость количественно переносят в мерную колбу на 25 мл, несколько раз ополаскивают водой пробирку и сливают ополоски в мерную колбу.

В мерную колбу добавляют 1 мл насыщенного раствора надсернокислого калия, перемешивают (при этом закисные соли железа переходят в окисные), приливают 4 мл 1,5 н раствора роданистого калия, доливают водой до метки и хорошо перемешивают. Оптическую плотность раствора определяют на фотоэлектроколориметре ФЭК-М или ФЭК-Н-57 по левому барабану с зеленым светофильтром нм) в кювете с рабочей шириной 2 см против контрольного раствора. Для приготовления контрольного раствора в мерную колбу на 25 мл вливают 2 мл воды, 1 мл насыщенного раствора надсернокислого

калия, 4 мл раствора роданистого калия и доводят водой до метки.

Содержание железа в исследуемом растворе определяют по калибровочной кривой.

Калибровочную кривую строят следующим образом. В 11 мерных колб емкостью 25 мл вносят последовательно рабочего стандартного раствора. В каждую колбу вливают по 15 мл воды, 1 мл раствора надсернокислого калия и 4 мл раствора роданистого калия, доливают водой до метки и перемешивают. Получают серию растворов с содержанием мг железа. Определяют оптическую плотность растворов на фотоэлектроколориметре (см. выше).

На оси абсцисс откладывают величины, показывающие содержание железа в каждом из растворов, а на оси ординат — оптическую плотность и, пользуясь указанными данными, вычерчивают калибровочную кривую.

Содержание железа в плазме или сыворотке вычисляют по формуле

где а — количество железа в испытуемом растворе, найденное по калибровочной кривой, мг; b — количество плазмы или сыворотки, взятое для исследования (обычно 2 мл); 100 — множитель для пересчета в миллиграмм-проценты.

Примечание. Калибровочную кривую готовит обычно лаборант один-два раза в семестр для каждого прибора, с которым работают студенты.