КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ (по Хагедорну — Иеисену)

Общее содержание сахаров в крови здорового человека составляет (в том числе глюкозы ).

Для количественного определения глюкозы в крови чаще всего пользуются микрометодом Хагедорна — Иенсена. Суть его состоит в том, что глюкоза окисляется железосинеродистым калием (красной кровяной солью) в щелочной среде до глюконовой кислоты, при этом красная кровяная соль восстанавливается до желтой (железистосинеродистого калия).

Реакция доходит до конца лишь в присутствии ионов Образуется нерастворимый цинк — железистосинеродистый калий

Избыток железистосинеродистого калия, не израсходованный на окисление глюкозы, определяется иодометрическим путем

Выделившийся иод оттитропывают тиосульфатом натрия (гипосульфитом):

Реактивы: а) оксалатная кровь. Кровь берут из ушной вены кролика. Чтобы предупредить ее свертывание, к 10 мл крови добавляют 0,01 г щавелевокислого натрия. Можно также брать кровь из пальца; б) содовый раствор железосинеродистого калия: 1,65 г и 10,6 г безводного углекислого натрия растворяют в мерной колбе на 1 л. Раствор хранят в склянке из темного стекла; в) тиосульфат натрия (гипосульфит, серноватистокислый натрий), 0,005 н раствор; г) едкое кали, 0,1 н раствор; д) сернокислый цинк. Готовят 45%-ный раствор сернокислого цинка перед употреблением его разводят в 100 раз, получая -ный раствор; е) хлорцинковый раствор: 10 г сернокислого цинка и 50 г хлористого натрия растворяют в 100 мл воды в мерной колбе на 200 мл, раствор доводят водой до метки и фильтруют; ж) иодистый калий: 5 г соли (не содержащей свободного иода) растворяют в 25 мл воды. Раствор готовят перед употреблением; з) уксусная кислота, -ный раствор; и) крахмал, -ный раствор.

В четыре пробирки наливают по н раствора едкого натра и -ного раствора сернокислого цинка. Выпадает студенистый осадок гидрата окиси цинка. В две пробирки сухой микропипеткой вносят по 0,1 мл крови. Пипетку погружают в раствор гидрата окиси цинка почти до дна пробирки, осторожно выпускают кровь и хорошо перемешивают ее с содержимым пробирки, 2—3 раза втягивая и выпуская жидкость. В две другие пробирки вносят по 0,1 мл дистиллированной воды (контроль). Все пробирки ставят в кипящую водяную баню точно на 3 мин. Белки крови выпадают в виде бурых сгустков. Содержимое четырех пробирок фильтруют через вату в четыре сухих пронумерованных стаканчика. Кусочки ваты в воронках до фильтрования промывают горячей дистиллированной водой (по 2 мл). Пробирки, в которых осаждали белок, ополаскивают 2 раза горячей водой (по 2-3 мл), присоединяя

промывные воды к основным фильтратам (через те же воронки с ватой). Фильтрат должен быть прозрачным.

Во все четыре стаканчика добавляют точно по 2 мл содового раствора железосинеродистого калия, а затем нагревают на кипящей водяной бане 15 мин. После охлаждения в каждый стаканчик доливают по 2,6 мл хлор-цинкового раствора, раствора иодистого калия и -ного раствора уксусной кислоты. Выделившийся иод оттитровывают из микробюретки 0,005 н раствором тиосульфата натрия (индикатор — раствор крахмала).

На титрование контрольной пробы должно быть израсходовано около н раствора тиосульфата. В опытных образцах объем раствора тиосульфата, израсходованный на титрование, обратно пропорционален содержанию глюкозы в крови.

Для расчета содержания глюкозы пользуются табл. 7.

Пример расчета. На титрование исследуемого образца израсходовано н раствора тиосульфата, контрольного — 2 мл. По табл. 7 находим, что раствора тиосульфата соответствуют 0,125 мг глюкозы, а 1,92 мл того же раствора — 0,014 мг.

Содержание глюкозы в 0,1 мл крови равно мг, а в мг.