ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВОГО И НЕБЕЛКОВОГО АЗОТА
Белки осаждают гидратом окиси меди (или основным уксуснокислым свинцом). Осадок белковых веществ отфильтровывают. В осадке определяют азот белков, в фильтрате — небелковый. Если известно содержание общего азота в исследуемом объекте, можно ограничиться определением или белкового или небелкового азота и по разности рассчитать значение второго показателя.
Реактивы: а) сернокислая медь (-ный раствор; б) едкий натр, -ный раствор; в) едкий натр, 0,25 н раствор; г) хлористый барий, 5%-ный раствор; д) реактив Несслера (см. с. 133); е) серная кислота, концентрированная ж) пергидроль; з) стандартный раствор хлористого или сернокислого аммония (см. с. 133); и) дистиллированная вода, освобожденная от аммиака.
Продукт, подлежащий исследованию, тщательно измельчают. Навеску 1—2 г тонко измельченного продукта (взвешивают на аналитических весах) вносят в химический стакан или коническую колбу емкостью 150 мл, прибавляют 50 мл горячей дистиллированной воды и нагревают до кипения. Если исследованию подвергаются зерновые продукты, богатые крахмалом, то к навеске добавляют теплую воду (40—45° С) и нагревают 10 мин. на водяной бане при температуре не выше 50° С. Для осаждения белков прибавляют 25 мл 6%-ного раствора сернокислой меди, перемешивают стеклянной палочкой и приливают (все время помешивая) 25 мл 1,25%-ного раствора едкого натра, после чего оставляют на 30—60 мин. для более полного осаждения белков.
После отстаивания осадка жидкость осторожно сливают через фильтр, стараясь не взмутить осадка. Осадок
несколько раз промывают горячей водой (вначале декантацией, а затем переводят на фильтр) до отрицательной реакции на ионы с раствором хлористого бария). Фильтр с осадком подсушивают и минерализуют, как при определении общего азота. В дальнейшем поступают, как описано выше (см. работы «Колориметрическое определение общего количества азота» или «Определение общего азота по Къельдалю»).
Найденное количество азота (за вычетом его содержания в фильтре) умножают на пересчетный коэффициент (6,25; 6,38 или 5,7, в зависимости от продукта, который подвергается исследованию), получая таким образом содержание белковых веществ.
Метод определения белкового азота трудоемок: промывание осадка требует продолжительного времени, минерализация фильтра с осадком протекает медленно, жидкость при сжигании вспенивается. Осадок белка поэтому не отфильтровывают, а вместе с надосадочной жидкостью количественно переводят в мерную колбу на 100 мл. Содержимое колбы доводят водой до метки. Прозрачную жидкость отделяют фильтрованием (или центрифугированием), аликвотную часть фильтрата подвергают минерализации и в ней определяют содержание небелкового азота.
Зная содержание общего и небелкового азота в продукте, можно по разности рассчитать количество белкового азота (и, следовательно, белков).