ФОТОМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕДУЦИРУЮЩИХ САХАРОВ

Количественное определение сахаров по антроновому методу.

Химизм реакции — см. с. 198.

Реактивы и приборы: а) антроновый реактив: 0,2 г перекристаллизованного антрона растворяют в 100 мл 96%-ной серной кислоты Употребляют только свежеприготовленный реактив. Продажный препарат антрона надо дважды перекристаллизовать из бензола или ледяной уксусной кислоты; б) стандартный раствор глюкозы: в 1 л кипящей воды растворяют 2,5 г бензойной кислоты. На аналитических весах отвешивают 1 г глюкозы. Навеску переносят в мерную колбу на 100 мл с помощью раствора бензойной кислоты, охлажденного до 20° С. Этим же раствором и доводят до метки. Стандартный раствор глюкозы хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой. Для приготовления калибровочной кривой стандартный раствор разбавляют, получая рабочие растворы с содержанием 20, 40, 60, 80 и 100 мкг глюкозы в 2 мл; в) фотоэлектроколориметр ФЭК-60, ФЭК-Н-57 или ФЭК-56, либо спектроколориметр «Спекол» (ГДР).

Экстракцию сахаров из материала и осаждение белков, пигментов, дубильных веществ производят, как описано в работе «Определение редуцирующих (восстанавливающих) сахаров в растительном материале».

В две пробирки вносят по 4 мл антронового реактива. Пробирки ставят в сосуд с проточной холодной водой и затем в одну из них, помешивая стеклянной палочкой, осторожно наливают 2 мл испытуемого раствора (в которых должно содержаться не более 100 мкг сахара). В другую пробирку добавляют 2 мл воды (контроль). Обе пробирки ставят на 14 мин. в баню с горячей водой (90°С), после чего охлаждают под краном и колориметрируют в фотоэлектроколориметре с красным светофильтром ( нм) против контрольного раствора, установленного на нуль. Толщина слоя жидкости в кюветах 0,5 см.

Содержание сахара в испытуемом растворе рассчитывают по калибровочной кривой, составленной по стандартным (рабочим) растворам глюкозы. На оси абсцисс откладывают величины, характеризующие содержание

держание сахара а на оси ординат — оптическую плотность. Калибровочную кривую для каждого прибора проверяют раза в год.

Количественное определение сахаров по реакции с пикриновой кислотой.

При взаимодействии редуцирующих сахаров с пикриновой кислотой они окисляются до соответствующих кислот, а пикриновая кислота восстанавливается в пикраминовую, обладающую красной или буровато-красной окраской:

Реактивы и приборы: а) пикриновая кислота, насыщенный раствор; б) углекислый натрий (карбонат натрия), 20%-ный раствор; в) спектрофотометр, фотоэлектроколориметр ФЭК-Н-57, или спектроколориметр «Спекол» (ГДР).

К 1 мл испытуемого раствора (в котором должно содержаться не более 3 мг редуцирующих сахаров) прибавляют 2 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 1 мл раствора углекислого натрия, после чего пробирку переносят на 30 мин. в кипящую водяную баню. Охлаждают до комнатной температуры и доводят дистиллированной водой до объема 10 мл.

Оптическую плотность раствора определяют при 455 нм (синий светофильтр).

Содержание редуцирующих сахаров рассчитывают по калибровочной кривой, составленной по стандартным растворам глюкозы (см. в работе «Количественное определение сахаров по антроновому методу»).

Метод пригоден для количественного определения глюкозы, галактозы, арабинозы, фруктозы, рамнозы, ксилозы, мальтозы, лактозы и крахмала.

Определение редуцирующих сахаров по реакции с 3,5-динитросалициловой кислотой. При взаимодействии сахаров с 3,5-динитросалициловой кислотой последняя восстанавливается в 3-амино-5-нитросалициловую. В остальном реакция протекает так же, как и с пикриновой кислотой.

Реактивы и приборы: а) динитросалициловый реактив: в мерной колбе на 1 л растворяют в дистиллированной воде 10 г 3,5-динитросалициловой кислоты, 300 г сегнетовой соли, 16 г едкого натра и доводят водой до метки. Раствор выдерживают два дня в темном месте, затем фильтруют в склянку оранжевого стекла и хранят в темноте; б) спектрофотометр, фотоэлектроколориметр ФЭК-60, ФЭК-Н-57, ФЭК-56 или спектроколориметр «Спекол» (ГДР).

К 1 мл испытуемого раствора (с содержанием не более 2 мг редуцирующих сахаров) прибавляют 2 мл динитросалицилового реактива, нагревают 5 мин. в кипящей водяной бане, охлаждают до комнатной температуры, после чего доводят до объема 25 мл.

Оптическую плотность раствора определяют при 530 нм (зеленый светофильтр).