29.11. Высокоповторяющаяся ДНК (сателлитная ДНК) локализована в центромерах

Многие высокоповторяющиеся ДНК можно выделить методом центрифугирования в градиенте плотности, так как их плавучая плотность отличается от плотности основной ДНК. Например, ДНК Drosophila virilis дает главный пик и три сателлитных пика с меньшей плотностью (рис. 29.18). Эти сателлитные пики содержат исключительно повторяющуюся ДНК. Каждая из них представляет собой повторяющуюся последовательность гептануклеотидов:

Роль высокоповторяющейся ДНК неизвестна. Но хромосомная локализация этой фракции была определена с помощью метода гибридизации in situ, разработанного Джозефом Голлом и Мэри Пардью (Joseph Gall, Mary Lou Pardue). Клетки иммобилизовали под тонким слоем агара и обрабатывали щелочью для денатурации ДНК.

Рис. 29.18. На этой кривой седиментации видны три отчетливых пика сателлитной и 1,671). Показан результат равновесного центрифугирования в нейтральном градиенте CsCl. [Gall J. G., Cohen E. H., Ather-ton D. D., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 38, 417 (1974).]

Затем этот препарат инкубировали с меченной тритием РНК, транскрибированной in vitro очищенной сателлитной ДНК в качестве матрицы. Гибриды радиоактивной РНК с участками хромосомы, содержащими сателлитную ДНК, выявляли с помощью радиоавтографии (рис. 29.19). Был получен очень четкий результат: сателлитная ДНК мыши встречается только в области центромер. Локализация этих последовательностей и отсутствие в клетке комплементарных им РНК объясняются, по-видимому, тем, что сателлитные последовательности участвуют в перемещениях хромосом во время митоза и мейоза.