27.5. В узнавании кодона участвует антикодон, а не активированная аминокислота
Мы уже упоминали, что антикодон тРНК - участок, узнающий кодон мРНК, и что узнавание происходит путем спаривания оснований. Играет ли какую-нибудь роль в этом процессе аминокислота, присоединенная к тРНК? Ответ на этот вопрос был получен следующим путем. Вначале цистеин присоединили к соответствующей тРНК (она обозначается
Рис. 27.6. Фотография скелетной модели дрожжевой фенилаланиновой тРНК, основанная на карте электронной плотности с разрешением 3 А. (Печатается с любезного разрешения д-ра Sung-Hou Kim.)
Затем присоединенный остаток цистеина превратили в аланин, обработав
никелем Ренея. В результате атом серы отделился от активированного остатка цистеина; связь цистеина с тРНК при этом не затрагивалась.
Так была получена гибридная аминоацил-тРНК, в которой аланин ковалентно присоединен к тРНК, специфичной к цистеину.
Рис. 27.7. Схематическое изображение трехмерной структуры дрожжевой фенилаланиновой тРНК. (По рисунку, любезно предоставленному д-ром Sung-Hou Kim.)
Какой кодон узнаёт эта гибридная тРНК - аланина или цистеина? Ответ был получен при использовании этой гибридной тРНК в бесклеточной системе синтеза белка. Матрицей служил случайный сополимер, построенный из
в соотношении
в норме он вызывает включение цистеина
но не аланина
Но когда в инкубационную смесь добавили
произошло включение аланина в полипептид. Другими словами, аланин включался так, как если бы к тРНК, специфичной к ци-стеину, был присоединен цистеин. Был сделан вывод, что узнавание кодона не зависит от аминокислоты, прикрепленной к тРНК.
Такой же результат был получен в тех случаях, когда роль матрицы выполняла гемоглобиновая мРНК. В качестве гибридной аминоацил-тРНК использовали С-аланил-тРНК. Единственный радиоактивный триптический пептид (т. е. пептид, содержащий
-аланин) соответствовал пептиду, который в норме содержит цистеин, а не аланин. С другой стороны, ни в одном пептиде, который в норме содержит аланин, а не цистеин, не было обнаружено метки. Этот эксперимент, равно как и предыдущий, убедительно доказал, что аминокислота в аминоацил-тРНК не играет никакой роли в выборе кодона.